b*********b
发帖数: 64 | 1 为什么不用FACS sorting？先用CD11b beads enrich, 然后sort。不知道你需要
isolate哪个population。我常做的是inflammatory monocytes，CCR2是个非常好的
marker。如果你需要isolate所有的monocytes的话，可以用CD11b和CD115。不过CD115
需要用two steps，priamry用biotinylated-CD115,secondary用Strepavidin-PE。 |
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b*********b
发帖数: 64 | 2 Activation of monocytes确实会decrease CD115 expression。不过用CD11b做
positive selection应该不会activate monocytes吧。对的，macrophages也表达CD115
。用CD11b和CD115分离monocytes，估计不会有人找你的碴。 |
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a*******g
发帖数: 33 | 3 Hello. I work with a line of myeloid cell specific gene KO mice recombined
by LysM-Cre. Boss would like to know the KO efficiency in adipose
macrophages. In stromal vascular cells from adipose tissue, CD11b magnetic
beads were used to seperate macrophages. Surprisingly, the CD11b negative
group showed a pure monocyte/macrophage group judged from morphology in Diff
quick stained slides, while the positive population included more
neutrophils.Anyone has similar adipose tissue macrophage seperation... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 4 Materials and Methods
Mice
FVB/N mice carrying the human DTR transgene under control of the CD11c and
CD11b promoters obtained from Dr. R. Lang (Divisions of Ophthalmology and
Molecular and Developmental Biology, Children’s Hospital, Cincinnati, OH)
were backcrossed onto NOD/LtJ mice (origi- nally purchased from The Jackson
Laboratory) for 10–12 generations to produce CD11c-DTR/NOD and CD11b-DTR/
NOD mice;
DTR transgenes were identified by PCR on tail DNA using primer se- quences
for DTR-1 (5'-A... 阅读全帖 |
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D*a
发帖数: 6830 | 5 用在paraffin的小鼠胚胎肺组织IHC上，
microvascular/capillary 我们用了vWF，reviewer让我们重复，推荐的是CD31, CD34
或者VE-cadherin，不知道哪个公司的好用？
免疫系统完全没概念，据说可以用CD11b看macrophage，但是据说CD11b在paraffin的组
织上不管用？其他的不知道了。。。
因为有时间限制，所以想最好是不要试太久，能一次管用最好拉～
有包子滴～ |
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s****9
发帖数: 932 | 6 几乎所有的Gr－1postive cell都应该是CD11b＋。
那群Liver中的CD11b－Gr1+细胞看起来像是liver中分出来的死细胞，不是真正的Gr1+。 |
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r*********t
发帖数: 15 | 7 想IF 染老鼠肺里的cd11b monocytes 和 m1 macrophages,找了很长时间，也没有发现
好的标记. cd11b 还好，F4/80 ,Cd206 染了到处都是，可能是肺里的macrophages 太
多了。 我该用cd68 和 iNos 吗，请各位大牛出个点子。 |
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r*********t
发帖数: 15 | 8 已经做了Facs.但还想在IF中显示 cd11b monocyte 和m1 macrophages. CD11b 和 iNos
都不能排除neutrophil,F4/80 不好，stain 了大多数肺细胞，不知道还有什么好的
monocyte/macrophage marker 可以用于老鼠肺，cd68 在肺里怎样？
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N******N
发帖数: 42 | 9 附一段我觉得比较有用的诊断信息。
血常规：白细胞计数6.55*10e9/L；血小板计数67*10e9/L；血红蛋白114g/L。骨髓病理
显示：骨髓增生极度活跃，原始粒细胞占40.4%，外周血原始粒细胞占49%，表达cMP0+
CD117-CD34+CD14-CD13+CD64-CD11B-CD15+CD7-HLADR-CD19-CD56-抗原谱。未检出t(8;
21)染色体异常及PLZF/RARA,MLL/AF9，DEK/CAN,AML1/ET0，NPM/MLF1，CBFB/MYH11，
PML/RARA,BCR/ABL融合基因。结论：AML（成熟型）。于2014-6-7开始行IDA方案化疗诱
导缓解，具体：伊达比星 10mg d1-3；阿糖胞苷200mg dl-7.2014-06-24复查白细胞计
数1.26*10e9/L,中性粒细胞绝对值0.44*10e/9L，血小板计数40*10e9/L，血红蛋白82g/
L。 |
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b****n
发帖数: 311 | 10 我疯了。大家快去看看这篇Nature Immunology吧，神作啊！
Integrin CD11b negatively regulates TLR-triggered inflammatory responses
by activating Syk and promoting degradation of MyD88 and TRIF via Cbl-b.
Han C, Jin J, Xu S, Liu H, Li N, Cao X.
Nat Immunol. 2010 Aug;11(8):734-42.
除了上面贴出来的Fig5b,还有好多figure非常像同一个sample的不同曝光时间啊，就文
章里那些歪七扭八的western，要能跑出那么多极像的带型，那就真见鬼了。
我怀疑是同个sample的：
Fig6a MyD88和TRIF左右的带型一致。
Fig7d p-IRF3左右的带型一致,7b的p-IkBalpha也很像。
FIg8e p-IKKalpha-IKKbeta左右的带型一致. |
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w******h
发帖数: 47 | 11 我是参照CURRENT PROTOCOL in immuology 的方法做的，和你的protocol差不多，只不
过我用的是 M-CSF,培养7天后flow cyotmetry显示有超过98%的细胞是CD11B+F4/80+,所
以他们是MACROPHAGE,不是monocytes。 |
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s********n
发帖数: 12 | 12 CD11b+, CD45+, Gr1+, low SSC, low autofluorescent基本都是neutrophil |
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R***t
发帖数: 14 | 13 我多说几句，理由很简单，别的实验室不能重复“ JEM received data from several
laboratories that independently attempted, but ultimately failed, to
reproduce the findings of Zorro-Manrique et al. In the opinion of the
Editors, these data compellingly undermine the conclusion that a distinct
population of immunosuppressive CD11b+F4/80+ macrophages expresses Foxp3 in
naive and tumor-bearing mice.”
几年前，Cell上有文章说cancer cell 表达 foxp3 （http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17570480），但是行内的人都不信。 foxp3 太有名太重要了，有太多的实验室研究了。这篇文章的结论如果是... 阅读全帖 |
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z*******6
发帖数: 679 | 14 我在想可不可以直接用CD115做positive selection呢？。。。既然CD11b也包括了
macrophage。。。
CD115 |
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b*********b
发帖数: 64 | 15 没有深究CD115，不过这个抗体的datasheet说some epithelial cells也表达CD115。而
且我做过不少positive selection，CD11b, CD11c, NK, 或者直接用anti-PE/APC，对
于很小的populations，纯度很难达到>70%。不过sorting确实很painful。 |
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l******n
发帖数: 298 | 16 刚看见，，，，
内皮细胞肯定是cd31,这个用confocal做吧，我的是别人做的，肯定是不好做，挑点好
结果就行了，别跟他们较劲。
macrophage经典的还是F4/80,老鼠就是这个，moma-2也不错哦。cd68好像用人多一点，
cd11b就不是很清楚，与分化有关但是不是特异macrophage marker.
Stefanie Dimmeler,做了不少cd31,你看看她有没有相关的cd31.把他的文章引用上，美
国的话做内皮我知道有douglas losordo,他应该也有相关的文章。
祝福好运。 |
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B****w
发帖数: 48 | 17 不好意思只有一个包子的伪币了，请各位大侠原谅。
刚接触干细胞和免疫细胞，遇到一个问题。我把IPS细胞加药处理后，细胞好像分化为
了免疫细胞--看起来像巨噬细胞和T细胞。已经测了F4/80,CD11b，CD4,CD8，lysozyme
M.不知道进一步怎么证明他们就是巨噬细胞和T细胞。功能？还是有什么特异性的分子
标记？各位大侠可否给提供一两篇文献。十分谢谢！ |
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s****9
发帖数: 932 | 18 If they express T cell receptor (e.g. CD3 or TCRbeta), they are bona fide T
cells. You can stimulate them with plated bounded CD3/CD28 to see whether
they can proliferate, which is a function indicator for T cells.
Regarding macrophage, you could stain a few typical macrophage marker, such
as F4/80, CD11b, lysozyme M as you mentioned. The morphology of macrophage
is quite different from T cells as well.
You do not need a reference. Instead, you should add some splenic T and
macrophage as posi... 阅读全帖 |
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S**********e
发帖数: 1789 | 19 给你看看我们系刚进来的助理教授
Vanderbilt University School of Medicine
Fingleton, Barbara Mary , Ph.D. Assistant Professor of Cancer Biology
Publications
Barrett, CW, Fingleton, B, Williams, A, Ning, W, Fischer, MA, Washington, MK
, Chaturvedi, R, Wilson, KT, Hiebert, SW, Williams, CS. MTGR1 is required
for tumorigenesis in the murine AOM/DSS colitis-associated carcinoma model.
Cancer Res, 71(4), 1302-12, 2011.
Koon, HB, Fingleton, B, Lee, JY, Geyer, JT, Cesarman, E, Parise, RA, Egorin,
MJ, Dezube, BJ... 阅读全帖 |
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d****d
发帖数: 214 | 20 果真如此，看以下四篇文章的题目就知道是一个套路的。而且每篇文章都有共同第一作
者。
Cui J, Li Y, Zhu L, Liu D, Songyang Z, Wang HY, Wang RF. NLRP4 negatively
regulates type I interferon signaling by targeting the kinase TBK1 for
degradation via the ubiquitin ligase DTX4. Nat Immunol. 2012 Mar 4;13(4):387
-95.
Ajibade AA, Wang Q, Cui J, Zou J, Xia X, Wang M, Tong Y, Hui W, Liu D, Su B,
Wang HY, Wang RF. TAK1 negatively regulates NF-κB and p38 MAP kinase
activation in Gr-1+CD11b+ neutrophils. Immunity. 2012 Jan 27;36(1):43-54.
Xia X, Cui ... 阅读全帖 |
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p****e
发帖数: 105 | 21 Good, thanks.
Lymphatic endothelium-specific hyaluronan receptor LYVE-1 is expressed by
stabilin-1+, F4/80+, CD11b+ macrophages in malignant tumours and wound
healing tissue in vivo and in bone marrow cultures in vitro: implications
for the assessment of lymphangiogenesis. J Pathol. 209:67–77. |
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C********4
发帖数: 308 | 22 一个条件性细胞剔除模式小鼠的诞生 (2013-02-22 18:10:22)转载▼
标签： talen 创业 大鼠基因敲除 基因敲除 杂谈 分类： 个人随笔
对于基因敲除（gene knockout）小鼠大家并不陌生，比如我们想要研究一个基因
在体内的功能，我们就可以把这个基因从小鼠体内敲除掉。而有的时候我们除了关心一
个基因的功能外，还想知道表达这个基因的细胞在体内是干嘛的。比如，我们想知道B
细胞是干什么的，胰岛细胞是干什么的？我们可以从小鼠体内把这些细胞清除掉（也叫
细胞剔除，cell depletion），一看不能产生新抗体了，或是胰岛素没了，血糖升高器
官衰竭了，我们就可以恍然大悟说：“你看，胰岛细胞是产生胰岛素的，B细胞是产生
抗体的”。然后就可以发文章到CNS（Cell, Nature, Science）了。当然这些都被别人
发现过了，是我们没有赶上好时代呀。
那怎样才能在体内把一群细胞清除掉呢？方法可能很多，但也真不多。这里我讲一
个非常简单的方法，就是白喉毒素介导的细胞剔除。白喉毒素（Diphtheria toxin, 简
称DT）大... 阅读全帖 |
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r*****i
发帖数: 117 | 23 我负责一KO小鼠colony，这个基因和一种免疫细胞相关。
此小鼠一岁时，spleen和liver出现tumor,明显比WT的大许多，见照片。
而且腿骨非常脆，一岁甚至8个月KO小鼠的腿骨就和2岁的WT的腿骨差不多，甚至更脆。
骨髓细胞中CD11b+细胞达到90%，有粒细胞白血病的征兆，正常的一岁的WT小鼠大约60-
70%。
请问大家我如何针对性的进行研究，比如spleen，liver和骨髓细胞。
我是个新手，老板对cancer也不是很熟，而且他也经常不在实验室，飞来飞去。
谢谢 |
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r*****i
发帖数: 117 | 24 第一，我的对照小鼠在一岁多的时候没有一个发现tumor，但是我的KO小鼠30%出现
tumor。
第二，有的KO小鼠在8-9个月大的时候，BM里面就出现CD11b+达到90%的状况。
所以，我觉得这不是偶然现象。 |
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f********1
发帖数: 367 | 25 我们想定位一个蛋白A在大脑中的表达具体在哪一种细胞，但是现在没有好用的A蛋白的
特异性抗体。
不知道有没有公司（口碑较好的）可以提供服务，做蛋白A的in situ hybridization，
同时可以用NeuN, CD11b or GFAP双标。
包子答谢。 |
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A**********5
发帖数: 15 | 26 这个老中JBC paper中为什么Anti Gr-1 Ab对liver中CD11b(negative)Gr-1(positive)
群体没有作用呢？难道这个抗体特异性剧强？ |
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x****1
发帖数: 1410 | 27 Knockout 一个基因后，Macrophage 的CD11b上升，CD11c, CD64, and EpCam下降。有
啥意义或者后果。 |
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x****1
发帖数: 1410 | 28 谢谢您的建议，很有用。
KO mice
已经check了其他myloid cells了， absolute #和percentage都check了。
F4/80 MHCII CD64， CD11b， CD11c， Ly-6G， Siglee-F, 都check了。其他的没做。
phagocytosis没做
是只有tissue macrophage 有变化。 |
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z*******6
发帖数: 679 | 29 interesting... monocytes neutrophils cd11b都没有变化？... 只有tissue
macrophage有变化？你说的是resident tissue macrophage还是challenge以后的
tissue macrophage？你做的是什么tissue的macrophage... 可以看看CD62L有没有变低
，也是一个相当敏感的marker... |
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