y*****o
发帖数: 1011 | 1 刚做了BrdU，用20ug/ml prok消化10min，效果很好。
现在要开始做TUNEL了（同一咱tissue），用的是Roche的in situ cell death detection kit，里面提到15ug/ml proK在25-37度下5-30分钟。
想知道如果知道了brdu中，用20ug/ml prok消化10min可以的话，在TUNEL中也用这个条
件行吗（20ug/ml会不会太harsh）？还是试比如15ug/ml proK 37度下 15-20min？
我觉得20ug/ml prok消化10min 应该可以，不过实验室的人不是很同意，说还是用15ug
/ml.。
新手，请指点一下吧，谢谢！ |
|
s*****g
发帖数: 7857 | 2 比如Annexin V/PI ,then Flow,可以快速测早期/晚期Apoptosis
而TUNEL 是根据DNA damage来测Apoptosis. The method should only identify cells
in the last phase of apoptosis.对吗? |
|
s**x
发帖数: 138 | 3 今天用WT FROZEN TISSUE做了 TUNEL,结果满视野都是POSITIVE的， 大概一半是，请
问如何改进呢 |
|
q**********0
发帖数: 335 | 4 Please help identify: what's the little spots between nucleus in TUNEL assay
? cell line is Huh 7. Thanks. |
|
vn
发帖数: 6191 | 5 不能和板上大文豪比生动 只能给要去的参考下我们的经验教训 顺便混包子
路上停prince williams玩到4点 开车 小孩睡觉 沿途有段堵 大概8点多到旅馆 就近吃
饭。。。
第一天 直奔va beach broad walk 离住的地方20min的
街趴 1.5／小时 但是我们没带quarter 走了几个店都不给换。。。 只好10／天
beach上很晒 租了个25的棚子 我很后悔没有买把遮阳伞带去。。。
骑了多人推荐的自行车 我家老大非挤在中间 不肯安全带绑上 我不得不一手抓着他 1
小时下来 ld和我都觉得挺累的。。。
沿海全是旅馆 但是厕所不对外 有公共厕所 手里得有地图才能找到。。。
下午去了往北的那个角 我想这就是小虎说的北边的趴车地方吧 居民区 路边不是很难
找地方
我个人最喜欢这边的海 广阔 不喜欢broadwalk那个吵和人多
不少很小的螃蟹在沙子里打洞
第二天
first landing park
先去了海滩 这里和前一天的beach不同 浪小 沙子粗
然后去了从64还是65街进去的那个boat ramp 因为听说那里有不少螃蟹 同一个门票
我们只带了一个网子。。... 阅读全帖 |
|
b*****l
发帖数: 9499 | 6 赞 boos :)
建议先用 DAPI image 来做 thresholding 找出每个 nuclei，可能还需要做
segmentation 来区分开相邻的 nuclei，这个用 watershed 比较好。然后用 nuclei
的结果做 mask 来处理 TUNEL 的图像（如果背景干扰比较大，而且背景跟信号有叠加
，可以先去一遍背景），就可以得出每个 nucleus 里的 TUNEL 信号来。把这 1000+
nuclei 的 TUNEL 信号统计起来画成一个分布，然后就可以用分峰软件准确地找到两个
峰，算出面积，就可以很准确地得出 apoptosis rate。同时，也可以找到最佳的
threshold 点来分 TUNEL 信号，这样就可以把原始图上的每个细胞核都标为 pos 或者
neg。这样做的好处是根据分峰结果可以算出两类错误分别是多少。
这个流程的每一步，都是很规范很常用的工具，可以 google 到 ImageJ 的代码。不知
道有没有人集成过，反正我到最后还是懒得集成了。
staining
see |
|
L****S
发帖数: 76 | 7 Dear all,
I got another problem for Image J. My boos asked me to score TUNEL staining
for apoptosis, that means I need to score almost 1000 DAPI (nucleus) to see
among them how many TUNEL positive cell according to her. That is a lot of
scoring under microscope.
I wonder whether I can take images and use Image J to score DAPI (I just
need to score TUNEL).
Is there anyone knows how to use Image J to score DAPI?
Thank you.
Lei |
|
r*********n
发帖数: 13992 | 8 很专业，赞。
不过我的mouse是处理过的，诱导了colitis，所以有大量的Inflammation和dysplasia
，情况应该跟没有处理的组织不同。tunel结果显示还是有不少apoptosis的（虽然不少
因素可以影响tunel的结果）。 |
|
m**********3
发帖数: 706 | 9 今天查文献，关键词搜索" survival，retinal neurons". 有一篇文章让我很迷惑。仔
细一看名字和地址，莫非是气功大师的杰作。求鉴定。如果真是，那严大师应该是所有
这些大师，教主里头科研素质最高的了。放在国内都可以PHD毕业了。甚至秒杀大部分
博导.
Int J Neurosci. 2002 Oct;112(10):1209-27.
XY99-5038 promotes long-term survival of cultured retinal neurons.
Yan X, Fong YT, Wolf D, Shen H, Zaharia M, Wang J, Wolf G, Li F, Lee GD, Cao
W.
Source
Institute of Chongqing Traditional Chinese Medicine, Chongqing, Sichuang, P.
R. of China.
Abstract
We have previously reported that XY99-5038, a preparation from a spec... 阅读全帖 |
|
U*******n
发帖数: 824 | 10 在导师任先达的指导下完成学位论文一个月后，李红良迎来了答辩。这也意味着他在暨
南大学药学院药理学专业的三年硕士学业即将结束。那是在2002年的5月。在《致谢》
部分，李红良说，导师三年来对他的教诲，“令学生终生受益”。
的确，这三年，师生二人的合作可谓“硕果累累”。在这本73页的硕士学位论文中列出
了期间发表的14篇文章（7篇英文，7篇中文）——除去两篇外，李均是第一作者；而其
导师则是绝大多数文章的通讯作者。
作为一名硕士研究生，李的创记录的“高产”引起一片哗然。2001年在其他绝大多数学
生还没有来得及收结果的时候，他就发论文了，而且一发不可收拾，当时就有同学举报
，药学院领导查了，但不了了之。
时光飞逝，当年的硕士“小李”，在获得北京协和医科大学博士，经历2年多国外博士
后，2008年11月从多伦多回到了武汉大学人民医院（当年3月以李红良为第一作者出版
的一篇论文随后被撤稿），并成为了教授。几年下来，李红良组建了据说是100多人的
研究团队，更有“杰青”，“长江”加身，事业可谓如日中天。
然而，2017年是他喜忧参半的一年。喜的是他一年发了5篇《自然医学》论文，忧的是
有举报人向... 阅读全帖 |
|
h*******r
发帖数: 847 | 11 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/m/pubmed/23284890/
CDA-2, a urinary preparation, inhibits lung cancer development through the
suppression of NF-kappaB activation in myeloid cell.
Wang X, et al. PLoS One. 2012.
Show full citation
Abstract
CDA-2 (cell differentiation agent 2), a urinary preparation, has potent anti
- proliferative and pro-apoptotic properties in cancer cells. However, the
mechanisms of tumor inhibitory action of CDA-2 are far from clear, and
especially there was no report on lung canc... 阅读全帖 |
|
|
|
x****6
发帖数: 4339 | 14 我知道粤语里面有 “筋兄弟”这个表达，和tunel buddy是一个意思，就是上过同一个
女人的男人们。 |
|
k**********4
发帖数: 16092 | 15 i always park at holland tunel and take the subway when i go to NYC |
|
s***d
发帖数: 15421 | 16 准备多花点钱，买阿里云2台服务器 一个在俄罗斯，一个在国内，内网通过内网ip
tunelling相连，俄罗斯ip 服务器用ssr或者别的，国内的ip也装好一个服务端，http
伪装。 目前大的机场都是如此标配。
就算如此，我的端口居然还被封了两次，只好换过端口继续干。 |
|
T*U
发帖数: 22634 | 17 这种房型corner lot很常见。优点是进门比较宽敞，没有tunel entry
型。 |
|
I****g
发帖数: 163 | 18 房子的insulation 不好，所以冬天很冷。今年想insulate attic. 就是加一层R30的
fibergrass roll。
请问怎么申请rebate. 不想用contractor，自己铺一层就行了，很简单的样子。
材料费能申请rebate吗？
另外，force air heating的vent/tunel 的地下室部分包上insulation, 有rebate吗？
听说，凡节约能源的renovation, upgrade都可以申请rebate. 怎么申请？哪申请？
谢谢。 |
|
|
t**********p
发帖数: 2672 | 20 今天又走了Mt Wilson， 不知道是第几次上了， 每一次上都不一样的路线， 每一次都
不一样的风光。 这次是走 Echo Mountain 到 Mt Wilson， 差不多是最长路线之一，
23 mi， 爬升5000。
最过瘾就是这度fire road 被关了
细心看看
被关的是 Muller Tunel 之前
虽然路是被关了， 但是关不我们， 我们选择继续前进
过了 Tunnel， 就走在大马路上， 风景还不错的
12:30 到 Mt Wilson, 刚好吃饭时候
Mt Baldy from Mt Wilson |
|
Y*****2
发帖数: 38613 | 21 flushing
or in the tunel of Time Sq subway station. |
|
X*****n
发帖数: 316 | 22 iSeven, any good news by now?
I still don't see much light in the tunel. |
|
m*******o
发帖数: 4236 | 23 大中华是真好，就是太远，不过有段时间他们也抽风了。
其他的我们都去，各有各的东西。
不知道住哪儿，快到HOLLAND TUNEL的555水产品不错。 |
|
c**********8
发帖数: 84 | 24 谢谢大家这些金玉良言。
给看不见light at the other end of the tunel的我们很多鼓励。
What doesn't kill you makes you stronger。这是一个百练成钢的过程，我们需要坚
持。
PhD |
|
c**********8
发帖数: 84 | 25 谢谢大家这些金玉良言。
给看不见light at the other end of the tunel的我们很多鼓励。
What doesn't kill you makes you stronger。这是一个百练成钢的过程，我们需要坚
持。
PhD |
|
l****g
发帖数: 80 | 26 哈工大校友湾区第二次聚会细节已敲定! 请在HITUSA上跟帖讨论和报名. 详情请见: http://t.cn/zjzALRR
Summary:
yuda0304 writes: "
时间定在11/17/2012晚上7:30
在京味轩, 76 S. Abel St. Milpitas, CA 95035 电话是408-262-9439.
预计9：00吃完去K歌，K歌地点在Music tunel, 1132 S De Anza Blvd Ste 10, San
Jose, CA 95129, (408) 446-0888.
预计吃饭和K歌人均消费在20刀，请自带现金。欢迎带家属和伴侣，期待大家的参与。
请在周5之前留意说明有几个人参加，方便定位置 ，谢谢"
另外湾区第一次聚会的情况请移步: http://tinyurl.com/bfvn8c9 |
|
|
a******e
发帖数: 36306 | 28 以上方法都试过了，除了ssh tunel（只有以前用linux系统的时候用来登路过学校机器
，公司的不知道怎么用），最后只有微软的live mesh能用。 |
|
|
b*****x
发帖数: 3786 | 30 晚点再研究一下，看哪样容易点。
另外是不是在公司用 VPN 或 ssh+tunel， 公司也没法 monitor 的？ |
|
|
z*********e
发帖数: 10149 | 32 最近ovpn有点坑爹，static key也出问题了
ssh tunel其实好用，又安全，就是菜鸟入门麻烦一点点 |
|
h*********o
发帖数: 62 | 33 also you can try jakarta's httpclient. also you can try socket programming.
pay attention to sth like http tunelling if you are from intranet |
|
M****e
发帖数: 70 | 34 TUNEL labeling of tissue slides would tell you roughly how many apoptotic
cells are present on the slides. or you can try Hoechst staining for DNA
fragmentation. apoptotic cells are stained more bright for Hoechst, which is
thought due to change of chromatin structure. this is usually done with
propidium iodide staining, which stains dead cells bright. so apoptotic cell
is propidium iodide dim, and Hoechst bright. membrane structure change occurs
during apoptosis, and annexin V binds specificall |
|
n****y
发帖数: 819 | 35 在弄个stable cell line with both GFP and RFP。好处是筛克隆的时候好筛，以后弄
到老鼠里面也容易track。但是好像以后也会有不少问题，比如以后做staining的时候
可选的颜色就少了（暂时发现了蓝色和橙色，但不知道和红绿色能不能分清楚）。还有
像TUNEL assay也不知道能不能找到commercially available的kit。还有什么方面需要注意，谁能share
一下经验，谢谢。 |
|
|
f*******e
发帖数: 354 | 37 不知道版上大仙有没有好的方法，冷乙醇处理后的细胞在后续离心中会大量损失，都贴
在壁上，离不下来，越洗越少，在做cycle，flow tunel and brdu labeling 中都有这
个问题，简直到了不可接受的地步。
谢谢啦。 |
|
r*********n
发帖数: 13992 | 38 Mouse colon tissue，做了很多次了，有时候有信号，有时候没有，快被折磨疯掉了，
TNND，俺还用TSA boost呢......
看人家说的这个抗体（cell signaling)的）挺好用的阿，我做的这个咋就这么不稳定
呢。试了其他的apoptosis marker的抗体，例如Cleaved-PARP，也是没有什么信号。但
是我做别的抗体就没什么问题，结果还不错，就是不知道这个的问题到底出在哪里，烦
死人阿。
TUNEL做完了，老板非要其他一个marker作比较，唉，童鞋们你们谁做过这个？能不能
说一下关键步骤在哪里啊？ |
|
i*********0
发帖数: 915 | 39 E15.5的cortex, 红色箭头指出的那些结构.
我用Tunel染过,这些东西是tunnel positive的. |
|
a****d
发帖数: 1919 | 40 Tunel staining is fine for brain section. |
|
b*********8
发帖数: 97 | 41 Is Tunel staining neuron specific? What about Fluoro Jade? |
|
a****d
发帖数: 1919 | 42 Tunel is not neuron specific, not sure about Fluro Jade.
To look at neurons, you might be able to double stain with NeuN or other
markers. |
|
m*********e
发帖数: 378 | 43 我真的只会一点点的并没有写上来啊，银染，southern, northern, caspase activity
, pgp activity, phage display, yeast knock out, point mutation, 果蝇酵母的都
没写的
其实是现在掌握的很好：从前掌握的很好（现在不做但是也能很快捡起来）：现在掌握
的一般1：1：1吧。
我本科的training很辛苦很全面，在实验室整整作了两年的intense banch work，提到
的技术大部分都在那两年学的，当然掌握程度不一样是有的。到了这边自己做课题，有
的技术磨的更好，有的也就荒废了
在这边死在了不大考谱的课题上，就转硕了，training也是照着PhD上的。所以不是一
定要比所有的PhD会的技术少呀。
western, protein expression in mammalian cells, flow cytometry of TUNEL
assay, enzyme assay, GFP, cell and small animal handling 是现在经常做的
realtime, PCR... 阅读全帖 |
|
m*********e
发帖数: 378 | 44 我在人家那里贴的快要歪楼了，还是在这里自己开个贴吧
今年夏天毕业，刚从thesis里面抽出点身来找工作，想作technician 或者specialist
的工作
本着实事求是的态度在这里老老实实的写写自己会的技术
现在经常做的有 western, GFP-fusion protein expression in mammalian cells,
flow cytometry of TUNEL assay, enzyme assay （proteasom, HDAC，cell
proliferation), cell and small animal handling
近年用到但不是很经常做的有 realtime, PCR array, IFHC, ELISA, coomassie blue
staining, genotyping
曾经完全掌握一天之内捡起来的有 plasmid construction, IP
曾经做过需要点时间上手的有 map-based cloning, expression of recombinant
protein (miRNA) in plants, a... 阅读全帖 |
|
|
a*****g
发帖数: 25 | 46 同意楼上说的降低浓度。
另外，不知楼主用的什么细胞？文献里有没有诱导这种细胞凋亡的报道？
如果有的话可以做个正对照。
还可以试试别的检测凋亡的方法：TUNEL、PARP等 |
|
