m*********D
发帖数: 1727 | 1 简单地说，就是ZFN和 TALEN利用蛋白质上AA和DNA的Nt的相互作用来识别DNA的序列,一
般识别的长度在9-18bp。它们往往是两个domain--一个用于DNA序列的识别，一个是切
割双链DNA。
CRISPR/Cas是一个蛋白-RNA complex.RNA用配对来识别特定的DNA序列，蛋白用来切割
双链DNA。识别的长度在20Nt。
切割完后，产生double strand break(DBS)。修复都靠细胞里面自己的系统。在有修复
模板（可以人工提供）的情况下，找模板来，你要提供就可以按你的设计引入mutation
等等；没有模板，细胞就自己连接两头，顺便会插入/删掉几个bp（indel)，这就导致
reading-fram-shift,基因失活。
CRISPR就目前来看，操作容易，识别的特异性高（长度大）。估计会取代前两个。
你可以详细读这篇：ZFN, TALEN, and CRISPR/Cas-based methods for genome
engineering
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S... 阅读全帖 |
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L**********n
发帖数: 87 | 2 【 以下文字转载自 xiaoyaogu 俱乐部 】
发信人: LisaHannigan (起舞弄清影，曾照彩云归。), 信区: xiaoyaogu
标 题: SGMO ZFN GENE THERAPY to cure HIV
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Mar 6 10:08:02 2014, 美东)
昨天5点NEJM， NYT出消息
盘后大涨30%以上（从19涨到24）
今早22-23入仓，看能不能近期翻番：） |
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A****A
发帖数: 16 | 3 实际上，目前大部分证据表明TALEN的off target效应要小于ZFN. TALEN现在的主要缺
点在于size太大，一个TALEN coding sequecne 至少要4kb, 而ZFN则只要1kb左右。而
且从目前以发表的和我们自己的数据来看，TALEN的剪切活性可能要低于ZFN。现在一些
实验室都在进一步优化TALEN的size以及活性，希望以后能有大幅度的提高。TALEN相对
于ZFN目前最大的优势是位点的选择范围更大。基本上每5-10bp就可以找到一个好的
TALEN位点。ZFN目前是200bp-500bp. 另外TALEN的出现打破了ZFN在genome
engineering领域的垄断地位。将大大降低reagent的价格。现在法国的Cellectis就提
供$5000TALEN的订制服务。Sigma的ZFN价格也会跟着降下来。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 4 嗯，你和zxt说的有一定道理，NaAgo的确不适合用来做筛选，而且不像Cas9／gRNA可进
可退既然用RNP也能用病毒。不过你说的那个转干细胞效率低的问题，难道不能直接用
基因枪（金颗粒裹上核酸和蛋白）来暴力转么？因为其实考虑到将来的医疗前景，对于
转干细胞，才是最需要用瞬转的场合。从原理角度上来说，NaAgo适合瞬转，而且适合
针对特定部位进行改造，不是指简单的切除，而是指Knock-In，因为筛选的标记放在
Knock-In片段上即可。NaAgo因为不需要PAM序列，而且脱靶率低，用来做 Knock-In最
合适。
对于你说的小片段DNA被捕捉，我猜你的意思是说那个小片段不小心贴错在什么地方然
后被某个不长眼的聚合酶当成primer 来用了？这个取决于哺乳动物的系统如何处理5'-
phosphate, 因为哺乳动物内部是用的３'-phosphate。那么上游的聚合酶合成到那个被
当成primer的gDNA那里的时候，会出现5', 3'段都有磷酸基的情况。系统如何处理这个
是一个有趣的问题。但是我想应该以前就有人研究过这种情况了。
对于你说的医学前景，我不同意你说的cas9/cpf... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 7 #注明译者，请随便转载：）
CRISPR英雄谱
埃里克・兰德（Eric Lander）
小鹿／译
三年之前，科学家们宣布，CRISPR技术能够对真核活细胞进行精准与有效的基因组编辑
。自此，这项技术手段已然震撼了科学界，数以千计的实验室正在将其运用于从生物医
药到农业的各个领域。然而，从一种奇特的细菌重复序列现象的发现开始，到确认这种
现象为适应性免疫系统，进而对它的生物功能特性的了解，直至开发为一项基因工程的
技术，这此前二十载相关的研究历程却不为人所知。本文正是着眼于填补这段科学历史
的空白，它讲述的是观念的演化历史和先锋人物的传奇故事，并且从中获得关于支撑科
学发现的优秀科研环境的启迪。
前言
很难想起曾经有哪一次科学革命像CRISPR这般如此迅速地改变生物学界。仅仅三年之前
，科学家宣布，CRISPR系统，即细菌通过纪录和精准攻击入侵病毒的DNA序列而进行自
身防御的适应性免疫系统，可以利用转化为一项简单而有效的技术在哺乳动物和其它生
物体的活体细胞内进行基因组编辑。CRISPR即此被全球数以千计的实验室运用于广泛的
领域，如创建人类遗传疾病和癌症的复杂动物模型；... 阅读全帖 |
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h******y
发帖数: 351 | 8 For the second question, the answer is Yes we can. There are several ways
to achieve this - Meganuclease such as ZFN or TALEN, or homologous rAAV
recombination.
Both ZFN and TALEN can make incisions on the chromosome DNA and then employ
non-homologous end-joining repair, which normally result in small deletion
in the endogenous loci to achieve knockout effect. But it is difficult to
knockin. For ZFN or TALEN, the biggest concern is off-target effect due to
the nature of these technologies.
rAA... 阅读全帖 |
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l**********k
发帖数: 189 | 9 稍微回答一下各位的问题。就象我讲的，公司做科研跟科研机构做科研不是一会事。从
很多回复来看，许多朋友可能知道ZFN/Talen/Crispr这些技术，也知道很多文章出来，
但实际上可能并不了解这些方法在基因敲进／条件性敲除方面的应用现状。
其实不管是ZFN, Talen还是Crispr，技术一出来大家就开始在想利用这些方法在没有ES
细胞的物种（比如大鼠）上做基因敲进和条件性基因敲除了，算算已经有至少5年了（
我记得2009年我去圣路易斯的Sigma公司的时候，他们就已经用ZFN做了很多敲除大鼠了
）。比如模式大鼠，为什么没有得到大范围的应用？ 实际上很多做神经研究的人都想
用基因敲进大鼠（比如加Reporter的），和条件性基因敲除大鼠。就是因为目前的所谓
ZFN／Talen/Crispr＋打靶载体注射受精卵的效率太低，没有哪家公司能够真正规模化
的提供稳定的技术服务。
我们用Jaenish文章里的方法也做不出来，但我听说他们有非常好的显微注射高手，所
以我们怀疑可能是我们公司的注射手艺还不够好。但不管好不好，总要把这个项目做起
来呀。所以我们一直在研发新方法。而这种方法我们觉得效率... 阅读全帖 |
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j******i
发帖数: 939 | 10 CRISPR能实现的功能（除了screening), zfn几乎都能实现。但是zfn已经被专利了。
crispr的最大意义就是不花钱谁都可以gene eiding了。zfn敲除ccr5受体已经临床有几
年了。如果敲除ccr5可行的话，crispr没有理由能赶上zfn. |
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发帖数: 1 | 11 作者：汤波
来源：中国科学报
2017年8月2日，《自然-生物技术》发布声明称，撤回韩春雨团队于2016年5
月2日发表在该期刊的论文，该论文撤回是韩春雨团队主动申请的，这一轰动一
时，争议长久的事件终于可以平息了，但是科学家们探寻新的基因编辑技术的脚
步不会停息。
基因编辑技术不断创新
今天，基因编辑技术看起来“无所不能”，其实它也是一步步不断发展完善
起来的。
上世纪九十年代，一种名为锌指核酸酶（ZFN）技术诞生，锌指核酸酶包括
锌指蛋白和核酸内切酶两个组成部分，前者负责识别基因组DNA中特异序列，后
者则负责将DNA切断，利用细胞自身DNA损伤修复功能，实现对目的基因的修饰。
由于ZFN技术能像Word软件编辑文字一样对目的基因进行修改，较之前的同
源重组技术大幅提高了基因敲除的效率，从而被称为第一代基因编辑技术，其在
随后十多年里独领风骚。
不过ZFN技术并不能对基因组中任何位点进行修改，脱靶效应较高，也就是
存在较多的非特异编辑，而且构建成本高且费时费力，到2009年，科学家们又开
发出另一种与其类似的基因编辑技术体系，即类转录激活样效应因子核酸酶
（TALEN）技术，是第二... 阅读全帖 |
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A****A
发帖数: 16 | 12 利用ZFN等reagents做Knock in应该是一些lab目前的奋斗方向。ZFN可以产生sequence
specific DNA double strand break. DNA双链断裂可以有效的提高homologous
recombination的频率，从而达到Knock in的目的。目前，在fish里面实现高效的HR还
很困难，即使在有ZFN的帮助下。我不是做fish的，主要做DNA repair pathway. 我觉
得可以通过一些genetic或chemical的手段抑制fish的NHEJ pathway，来增加HR的频率。
model
transpare
rep
to
很多
serious的
大好 |
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j******i
发帖数: 939 | 13 如果预测的准确率很高的话 我觉得还是可以让zfn起死回生的 虽然现在也没死 zfn最
主要的优点是finger是人体的细胞本身就使用的 而后两者bacteria来的 如果用来gene
therapy的话 zfn引起免疫反应的可能性可能小 |
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l**********k
发帖数: 189 | 14 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
基因组编辑系统。然后我们就看这个系统是不是可以在大鼠上用。因为信心比较大，我
们就直接进行双基因敲进实验了。分别是在大鼠CD4基因后面加上DsRed，在FoxP3后面
加上 IRES-DTR-2A-EGFP-p... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 15 if by TALENs, ZFNs and >CRISPR/Cas
pls check below database at least three month one time:
>EENs (Engineered EndoNucleases) are artificial endonucleases designed to
target special DNA sequences. TALENs, ZFNs and >CRISPR/Cas systems are the
most frequently used EENs.
http://eendb.zfgenetics.org/index.php
EENdb is a database collecting reported TALENs, ZFNs and CRISPR/Cas systems
targeting organism. EENdb also provides a knowledge base of EEN engineering
and other utilities of EENs.
rabbit:
http:... 阅读全帖 |
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j******i
发帖数: 939 | 16 对的。用来人体治疗的话，看zfn就行了。zfn发展也有十来年了吧，用到临床也有好几
年了。crispr还得追寻着zfn的足迹走，路远着呢。
be
.. |
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j******i
发帖数: 939 | 17 1. 对于基础研究，Cas9／gRNA比NgAgo/gDNA好用多了。既可以用病毒deliver，也可以
用瞬时的RNP；既可以体外用也可以体内用，还能加个筛选标记。
NaAgo当然可以用DNP deliver，但很难用病毒deliver. RNP/DNP在细胞系效率还行，在
干细胞中就困难了－不是转不进去就是死一大片（电转）。所以对于难转的细胞或者转
体内，还是得依靠病毒载体。还有，小片段的DNA可能被基因组捕捉，造成‘off-
target’; gRNA就没有这个问题了。
2. 对于临床，无论cas9/cpf1还是NgAgo对于zfn/talen就没什么优势，甚至是劣势了－
因为临床只要有几个好用的核酸酶就够用了。反而细菌蛋白诱导免疫反应的可能性比较
大。临床上走在最前面的是zfn. 最近还有用病毒载体装载zfn上病人的临床了，所以不
用太害怕病毒载体，害怕来自不了解。
事实上，对于基因治疗，基因编辑能不能最后取代病毒载体还是个疑问呢！慢病毒载体
就比很多人想象的要安全，而且慢病毒基因治疗药物马上就要出来了－这还不包括car-
t呢。
3. i) 诺奖要是给整个基因编辑领域发，那N... 阅读全帖 |
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j******i
发帖数: 939 | 18 RNP转干细胞就是用暴力啊（电转）基本上一半细胞会挂掉 剩下的细胞有没有伤残还不
好说 我看不出NgAgo在ki和ko上比Cas9有什么优势 至于pam ngg到处都是 而且cas9的
pam也是可以改变的 至于脱靶 NgAgo还需要接受更严格的检验 而且现在已经有改进版
本的Cas9了 号称没有脱靶 NgAgo在GC rich地方确实有优势
外源的dna有插入到基因组的风险 小片段的几率还大一点 这可能跟细胞自发的双链断
裂有关 具体说明原理不大清楚 5‘P oligo是不是特殊还没有证据 试想 如果用来做基
因治疗 这些gDNA搞不好就被整合到基因组离去了 这不是一件很可怕的事情吗
可能超乎你的想象 Sangamo现在在做一件事情就是直接把zfn deliver到肝治疗血友病
行不行的通 临床数据说话 基因治疗总体还是在摸索阶段 各种方法都该试试 说不定行
得通呢
zfn设计的好脱靶率可以很低 即使有脱靶 不在重要基因上就问题不大 zf结构在细胞中
普遍存在 而无论Cas9或者NgAgo用到临床上都有被免疫系统清除的风险 当然 用作基础
研究zfn／talen已经被淘汰了
'- |
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z*t
发帖数: 863 | 19 这么贵。。。是sigma custom service的价格么？
现在能从现成的public avaible zfn library中找我要target sequence的zfn么？ |
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M*****n
发帖数: 16729 | 20 knock-in is a plus, 但是knock-out 最重要。
现在ZFN的效率太低了， 最多20%。你如果能弄一个比较efficiet的ZFN,比如80%, 那么
knock-in有没有也无所谓。
要的 |
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M*****n
发帖数: 16729 | 21 俺对ZFN这个field知道不多,
好像作knock-in，还是要靠hom rec的， 虽然ZFN可以有所帮助。
要的 |
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f**u
发帖数: 346 | 22 我看了几个帖子有点晕了，ZFN的目的不就是增加HR的效率吗？
难道在鱼里面，ZFN有什么其它的用处？ |
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i*****g
发帖数: 11893 | 23 问一个问题，
我现在一个相关project是 zfn， target 就不说了，虽然说了也没有什么。
问题是经理是个 adeno viral控，什么都往那里面装
这个zfn对adeno packing有多少影响？ 是否包装困难？（当然，我知道文献有成功报
导，不过，我历来是非常negative,） |
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A****A
发帖数: 16 | 24 具我所知，几个fish labs正在联合用ZFN搞大规模的knock out resources。ZFN以及相
关技术最近会有比较大的进展。大家如果感兴趣，可以关注一下最近的TALEN技术。在
最近1-2年内，估计任何试验室都可以自己合成reagent去target任何基因。cost不会比
买限制性内切酶高太多。
model
transpare
rep
to
很多
serious的
大好 |
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p*****m
发帖数: 7030 | 25 呵呵 来了个fish person。。你看最近有篇fish ZFN就是用的NGS，有几篇cell line
ZFN也是。还是很方便的啊，而且超级便宜其实，一个pool可能测序100快都不到吧，因
为可以mix几个pool一起
page看不出来point mutation吧，qPCR怎么看？好像也看不出point mutation吧 |
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l*******i
发帖数: 153 | 26 现在基因治疗的第一问题都存在争议：安全性第一还是有效性第一？
参加过几次欧洲基因治疗的会议，很多人focus有效性上，但是最近的几个clinical
trial都是死在安全性上。
德国的WAS trial，10个孩子中现在4个都有大问题。几年前的CGD trial，两例病人两
年后都出现问题。
这些主要与目前用的病毒载体有关系，一是病毒载体的bcakbone本身有强的promoter/
enhancer的作用，而且病毒载体有偏向于插入TSS附近，一旦整合进基因组中，就很可
能影响neighboring gene的表达，这也是为啥造成oncogene激活的很重要一个原因。尽
管现在开发了第三代病毒载体（SIN）,但是这个效应还是存在。
第二，random insertion的问题。现在的技术方法，并不能保证病毒载体的单拷贝或两
拷贝插入基因组中，在造血干细胞上，甚至连确切的拷贝数都难于计算，只能用平均拷
贝数平评价。这样，在动物身上安全，translated 到人身上，整合就不一定就是相似
的模式；第一次试验和第二次试验 insertion profile也不一样。结果，有点像撞运气。
... 阅读全帖 |
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l*******i
发帖数: 153 | 27 现在基因治疗的第一问题都存在争议：安全性第一还是有效性第一？
参加过几次欧洲基因治疗的会议，很多人focus有效性上，但是最近的几个clinical
trial都是死在安全性上。
德国的WAS trial，10个孩子中现在4个都有大问题。几年前的CGD trial，两例病人两
年后都出现问题。
这些主要与目前用的病毒载体有关系，一是病毒载体的bcakbone本身有强的promoter/
enhancer的作用，而且病毒载体有偏向于插入TSS附近，一旦整合进基因组中，就很可
能影响neighboring gene的表达，这也是为啥造成oncogene激活的很重要一个原因。尽
管现在开发了第三代病毒载体（SIN）,但是这个效应还是存在。
第二，random insertion的问题。现在的技术方法，并不能保证病毒载体的单拷贝或两
拷贝插入基因组中，在造血干细胞上，甚至连确切的拷贝数都难于计算，只能用平均拷
贝数平评价。这样，在动物身上安全，translated 到人身上，整合就不一定就是相似
的模式；第一次试验和第二次试验 insertion profile也不一样。结果，有点像撞运气。
... 阅读全帖 |
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j******i
发帖数: 939 | 28 TALEN之前的ZFN已经可以做到定点修饰了 差不多有十年了吧 但是 没火起来 因为zfn
巨难设计 一个repeat识别三个bases 但是 对应性很差 成功率很低 普通实验室根本耗
不起时间 sigma虽有卖 但是一对一万人刀吧 买不起 买了也不是百分百能用 talen才
出现几年 但是因为容易设计 一个repeat识别一个base 对应性很好 自己addgene买个
kit就能鼓捣了 一个星期就能拿到一对有效的talen 当然 那是得有相当经验的人
crispr的文章去年才出来了 敏感的人去年就意识到这个东西厉害了 现在 也不算晚 拿
来放到自己的project里 应该还能发好文章 crispr厉害的地方只要合成20个bases的
oligo就够了－当然为了方便克隆还是两头要加一些东西的 这太逆天了 比较明显的缺
点就是只能识别23个bases 更多缺点还有待发现 |
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b******k
发帖数: 2321 | 29 crispr确实神。要是再有几篇各种动物里PoC的paper出来，TALEN可能也要像ZFN一样进
博物馆了，呵呵
zfn |
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d*******3
发帖数: 15 | 30 我觉得没什么意义，TALEN出来了完全没ZFN啥事了，本来ZFN的特异性就有很大问题，
而且不是每个基因都能有合适的靶点。并且CAS9更快了。。。去看看Keith Joung的
publication就知道了。 |
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j******i
发帖数: 939 | 31 ZFN, TALEN, CRISPR我都在用。挑最喜欢的，还是ZFN，因为他小，很容易放到viral
vector里边。但是它贵啊，自己合成的话，成功率又不高。TALEN克隆费力了一点，不
过熟练的话，一周就能拿到了。CRISPR定oligo, 克隆，怎么也要一周了吧。TALEN的专
一性很好，CRISPR的潜在off-targets一搜能搜出一大堆，吓死人。
shRNA是RNA识别RNA, CRISPR是RNA识别DNA+cas9识别DNA, 所以你不能简单的说都是RNA
guide. Cas9没有gRNA就没有办法cut on target了。当然，不知道cas9本身有没有细
胞毒性。 |
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j******i
发帖数: 939 | 32 我就说说我熟悉的领域基因编辑吧（虽然elife这方面发文很少）。现在热门的CRISPR,
最早的几片经典文章之一就是发在elife的，另外几片在Science 和 Cell。RNA-
programmed genome editing in human cells （2013年一月份）， 目前引用 144。最
近elife发了一篇关于蛋白运送ZFN的文章Targeted genome editing by lentiviral
protein transduction of zinc-finger and TAL-effector nucleases。马上Nature也
发了一篇mRNA来运送ZFN的文章。 |
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j******i
发帖数: 939 | 33 我就说说我熟悉的领域基因编辑吧（虽然elife这方面发文很少）。现在热门的CRISPR,
最早的几片经典文章之一就是发在elife的，另外几片在Science 和 Cell。RNA-
programmed genome editing in human cells （2013年一月份）， 目前引用 144。最
近elife发了一篇关于蛋白运送ZFN的文章Targeted genome editing by lentiviral
protein transduction of zinc-finger and TAL-effector nucleases。马上Nature也
发了一篇mRNA来运送ZFN的文章。 |
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j******i
发帖数: 939 | 34 有意思的是他们自己都还没有想好如何用CRISPR挣钱。CRISPR最大的一个用途也许是
基因治疗，但在基因治疗领域ZFN远远的走在前头，至少要领先五年，而且CRISPR究竟
能否用在人体还有待检验。ZFN的影响力比较小众，主要是因为他已经被专利了；如果
CRISPR也被专利，不知道是否会限制其在基因治疗领域的研究。 |
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j******i
发帖数: 939 | 35 我觉得这个数字有夸大的嫌疑。CRISPR能做的事，zfn, talen几乎都能做。无非就是改
造基因组，应用到农作物上，治疗疾病什么的。CRISPR哪来治疗疾病ex vivo还可以（
即使这些，也远远落后zfn)，in vivo目前基本不可能，除非有突破性的deliver方法出
现。 |
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j******i
发帖数: 939 | 36 Sangamo抱着zfn的专利，客观上促使了其他人寻找更容易更便宜的基因编辑方法。
TALEN出现，还没来得及享受欢呼，就突然又杀出来个crispr, 风头都被抢走了。公平
发诺奖的话，zfn, talen, crispr，应该一起发。但如果只发CRISPR也并不太意外，诺
奖失误的次数也不少。 |
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j******i
发帖数: 939 | 37 基因编辑的诺奖可能性比较大的情况是 1.ZFN,TALEN,Cas9各找一个发（没有NgAgo,
cpf1,以及以后将发现的各种RNA, DNA引导的细菌蛋白的事－因为它们都可算做Cas9的
延伸）2. 基因编辑共发两个诺奖－ZFN, TALEN加上更少见的Meganuclease各找一个发
；然后Cas9系列再发一个奖（卡彭特，多纳，张峰均分)。NgAgo得奖的可能性不大，因
为一是可以算作CRISPR/Cas9的延伸，二是gDNA不大适合病毒载体装载，大大限制的它
的用途，应用范围上比不过CRISPR/Cas9。 |
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j******i
发帖数: 939 | 38 横着和ZFN一起发 TALEN不能不发吧 再加一个Cas9 已经三个了 就算NgAgo也发 韩老师
也得排到发现65度活性Ago的人后边去吧
当然 还有一种可能诺奖给基因编辑发两个奖 一个是给蛋白核酸酶 zfn, talen,
meganuclease 一个给核酸介导的核酸酶 这样NgAgo就有希望了 韩老师或许有些机会 |
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发帖数: 1 | 39 一个基因编辑很难给两项炸药奖吧
好多重要的工作都没得奖呢 在排队
说来重组DNA技术居然都没发过奖
很不应该啊
[在 jessecai (jesse) 的大作中提到：]
:横着和ZFN一起发 TALEN不能不发吧 再加一个Cas9 已经三个了 就算NgAgo也发 韩老
师也得排到发现65度活性Ago的人后边去吧
:当然 还有一种可能诺奖给基因编辑发两个奖 一个是给蛋白核酸酶 zfn, talen,
:meganuclease 一个给核酸介导的核酸酶 这样NgAgo就有希望了 韩老师或许有些机会 |
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j****n
发帖数: 3370 | 40 这么多钱 肯定是所有技术一起搞
说不定zfn talen也一起搞
听过某个公司的报告 zfn貌似比crispr更适合做大片段的knockin
其实更应该集中发展新的 crispr ago系统还有那么多未知的未开发 |
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f***y
发帖数: 4447 | 41 http://360zhyx.com/home-research-index-rid-66033.shtml
2016年9月15日，南京大学的周国华研究员、赵庆顺教授和朱敏生教授在《Genome
Biology》杂志上发表了一项重要的研究，一种新DNA编辑工具：结构引导内切酶SGN（
structure-guided endonuclease）。SGN工具与现有的DNA编辑工具不同，最强大之处
就是不受靶序列的限制，能特异性识别和捕获目标，来准确切割任何DNA序列。
而目前，其他DNA编辑技术，如最热门的CRISPR-Cas技术，争议最大的韩春雨发现的
NgAgo技术，还有ZFN、TALEN等技术，都是通过序列识别来实现靶向切割的，会受到序
列偏好的限制。
2016年5月，河北科技大学的韩春雨教授在《Nature Biotechnology》杂志上发布了一
种可以替代CRISPR-Cas的基因组编辑技术：NgAgo技术。因为这样一篇突破性的研究论
文，韩春雨教授从一个学术圈的“泛泛之辈”一跃成为“诺贝尔奖级别的科学家”。然
而，由于实验重复性的问题，很多国内外学者发现实验无法重复，韩春... 阅读全帖 |
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c******9
发帖数: 8 | 42 安特诺生物医药（厦门）有限公司是厦门市第三批“双百”创业、创新领军人才、
外籍归国博士于2012年12月成立的中外合资公司，落户于厦门火炬创业园。公司主要从
事肿瘤监测和免疫治疗相关的实验和临床研究，提供从美国引进的专用于评价肿瘤治疗
效果与转移程度的“循环肿瘤细胞检测”服务，是一家集科研与检测服务于一体的生物
高科技公司。公司核心研发科学家和管理人员均为生物医药领域具有几十年工作经验且
具行业权威性人物。
2013年底，因公司发展需要，整体搬迁至厦门火炬（翔安）产业区，并投资新建了
国家级标准化的GMP实验室。
目前，公司与厦门大学药学院转化中心建立了项目合作关系，成立了厦门大学药学
院安特诺细胞医药研发中心，并与多家三甲医院开展临床科研与应用研究。
公司正处于全力发展阶段，诚邀从事肿瘤免疫学、免疫学方面的有志之士具有博士
及以上学历者加盟，负责实验室研发及管理。我们的科研、管理团队将为您提供良好的
专业发展机会。对于入聘人选，公司将提供良好工作环境与丰厚的福利和薪酬待遇。
工作地点： 厦门市翔安区厦大药学院
薪酬范围：US$ 30,000-40,00... 阅读全帖 |
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p*****m
发帖数: 7030 | 43 I think you can do cKO using zinc finger, just target ZFNs to specific c
ell types |
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a********k
发帖数: 2273 | 44 you are right. but then what are the advantages of this ZFN tech? |
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p*****m
发帖数: 7030 | 45 用ZFN搞得吧 不过好像是说也就cover一千来个gene |
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p*****m
发帖数: 7030 | 46 basically the only thing you can do if morpholino. No RNAi, No good knock
out (the ZFN does not work for every gene); no good conditional KO, no KI... |
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S*****s
发帖数: 287 | 47 我比较土，这个技术 Nature，PNAS 上都发了一堆文章了我才从 Sigma 的 rep 那里听
说。查一查文章觉得蛮吸引人，所以过来八一八。版上有没有牛人正在用这个技术？好
不好做？看起来试剂什么的都是 Sigma 垄断，做起来费用高不高？我目前正在用 BAC
做一个 transgenic mouse line，将来打算做 knock-in mouse。如果我不做 gene-
targetting 而改用 zfn 来做 knock-in，能不能降低技术难度？谢谢各位指教！ |
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a********k
发帖数: 2273 | 48 zfn是给那些没有KO的模式生物用的，主要产生移码突变，不能用来做KI。
做起来和普通的KO一样贵，没啥优势。
BAC |
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S*****s
发帖数: 287 | 49 谢谢楼上各位。我正在看这方面的文章，特别是七楼 jcb 老兄列出来的那篇，越看越
觉得不错。我做的蛋白目前没有 endogenous cell line，而我研究的方向也包括 mRNA
intron splicing。现在我都是用引入了 CMV promoter 的 BAC DNA 做 transfection
。看看这些文章我倒是想买点这个 ZFN 然后把 HEK293T 细胞的基因组改一改，改造出
一个可以 endogenous cell line 来。明天和 sigma 的 rep 继续谈谈。 |
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A******y
发帖数: 2041 | 50 Sigma's technology is from Sangamo biosciences where it acquired the license
of the technology from Scripps. The technology has been in development for
over 10 years and Sagamo has over 10k of sequence specific ZFN. Academic
labs are playing catch up, and I bet Sigma can do in two months where
academic lab will take years (because Sangamo already did it but all
propitiatory). |
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