从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（三） - Biology版

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Biology版 - 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（三）

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r****o
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本文献给YL
（三）不溶的sigma32
四月六号早上，我们开始了第一模块的实验，Burgess教授负责。这老兄研究了一辈子E.Coli的RNA　polymerase。E.Coli RNA polymerase　核心酶是一个蛋白质复合体，只有合成RNA的活性，却没有
识别DNA的能力。Sigma系列因子能够识别启动子, 并且与核心酶结合，从而实现转录。我们这个实验
的核心主角就是其中一个因子，叫sigma32。Sigma32可以识别heat shock genes的启动子。Sigma 32
过表达在大肠杆菌里面的时候，绝大部分形成了不溶的包涵体(inclusion body),我们的任务就是要用变性
剂溶解变性不溶的蛋白，然后做重折叠。
所有的buffer几乎都已经配好了，所以直接做就行了。我们先用1% Triton 来溶解细菌本身的一些蛋白，
inclusion body 相当稳定，不溶于triton,所以这一步，绝大部分垃圾就被去掉了。
下一步就是用变性剂来溶解inclusion body。用什么好呢？Burgess教授提到了sarkosyl。sarkosyl(N-十

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