m*********7
发帖数: 5207 | 1 前两天作WB。因为蛋白在细胞里丰度很低，所以用的是GE healthcare生产的ECL plus.
结果曝光时间不到5秒，整个blot就全黑了。通常这种情况下，我会等信号自然衰减，
大概2-4小时之后再去darkroom.但那天因为急着接孩子，我就突发奇想，把那张已经曝
光了的片子放在blot上，但是避开黑色的部分。把新的片子压在旧片子的上面，曝光十
秒，出来条带非常清晰。
反正那张废了的片子不用白不用，正好可以屏蔽信号。而且这样做也省时间。不过如果
你用phospho-imager，就不知道这招能不能用了。 |
b****r
发帖数: 17995 | |
m*********7
发帖数: 5207 | 3 不行！试过了，虽然能看见条带，可是背景太高。
【在 b****r 的大作中提到】
: 你就曝光1秒钟不就可以了
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s******y
发帖数: 28562 | 4 一秒钟手会晃，容易出鬼影
我也和楼主分享一下我的经验：就是把膜用PBST 洗一洗,
然后把ECL PLus 直接用PBS稀释5~6倍再放到膜上。
【在 b****r 的大作中提到】
: 你就曝光1秒钟不就可以了
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s******s
发帖数: 13035 | 5 我做的时候都是用tape吧膜贴在盖子上，film放在
下面，一关一开就行了。别说1秒，我看0.2-0.3秒都
没问题，就是一瞬间曝光，也不会有鬼影
【在 s******y 的大作中提到】
: 一秒钟手会晃，容易出鬼影
: 我也和楼主分享一下我的经验：就是把膜用PBST 洗一洗,
: 然后把ECL PLus 直接用PBS稀释5~6倍再放到膜上。
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l****y
发帖数: 398 | 6 nice!
【在 s******s 的大作中提到】
: 我做的时候都是用tape吧膜贴在盖子上，film放在
: 下面，一关一开就行了。别说1秒，我看0.2-0.3秒都
: 没问题，就是一瞬间曝光，也不会有鬼影
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r***e
发帖数: 2539 | 7 你这个发明比较牛！
sunny说的方法我也试过一次，稀释了好像一点信号都没有了，后来就没用过。
楼主，你用蓝色的x光片吗？感觉很透明啊，没什么阻挡？
【在 s******s 的大作中提到】
: 我做的时候都是用tape吧膜贴在盖子上，film放在
: 下面，一关一开就行了。别说1秒，我看0.2-0.3秒都
: 没问题，就是一瞬间曝光，也不会有鬼影
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c**k
发帖数: 1228 | 8 happen to have high noise Ab, tomorrow will have a try.
-by the way, recently i am looking for reviews. any help regarding this will be appreciated.
plus.
【在 m*********7 的大作中提到】
: 前两天作WB。因为蛋白在细胞里丰度很低，所以用的是GE healthcare生产的ECL plus.
: 结果曝光时间不到5秒，整个blot就全黑了。通常这种情况下，我会等信号自然衰减，
: 大概2-4小时之后再去darkroom.但那天因为急着接孩子，我就突发奇想，把那张已经曝
: 光了的片子放在blot上，但是避开黑色的部分。把新的片子压在旧片子的上面，曝光十
: 秒，出来条带非常清晰。
: 反正那张废了的片子不用白不用，正好可以屏蔽信号。而且这样做也省时间。不过如果
: 你用phospho-imager，就不知道这招能不能用了。
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m*********7
发帖数: 5207 | 9 谢谢分享，下回我试一试。
【在 s******y 的大作中提到】
: 一秒钟手会晃，容易出鬼影
: 我也和楼主分享一下我的经验：就是把膜用PBST 洗一洗,
: 然后把ECL PLus 直接用PBS稀释5~6倍再放到膜上。
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m*********7
发帖数: 5207 | 10 我用的是无色的kodak film，比较厚。
【在 r***e 的大作中提到】
: 你这个发明比较牛！
: sunny说的方法我也试过一次，稀释了好像一点信号都没有了，后来就没用过。
: 楼主，你用蓝色的x光片吗？感觉很透明啊，没什么阻挡？
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c******r
发帖数: 3778 | 11 是这样。其实可以保存一张空白曝光的film专门干这个用，相当于neutral density
filter：） |
A******y
发帖数: 2041 | 12 I have seen people using 5 films in a cassette on top of each other.... |
f*********r
发帖数: 1233 | 13 如果这么强，你应该能在暗室里，用肉眼看到目标条带。 |
s******s
发帖数: 13035 | 14 不在暗室都能看到。我以前有个超强antiserum，
膜上都是黄色的条带，连暗室都不用
【在 f*********r 的大作中提到】
: 如果这么强，你应该能在暗室里，用肉眼看到目标条带。
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s****a
发帖数: 1039 | 15 比pierce supersignal west femto灵敏很多么？
我们这没暗室做film只有ccd camera
plus.
【在 m*********7 的大作中提到】
: 前两天作WB。因为蛋白在细胞里丰度很低，所以用的是GE healthcare生产的ECL plus.
: 结果曝光时间不到5秒，整个blot就全黑了。通常这种情况下，我会等信号自然衰减，
: 大概2-4小时之后再去darkroom.但那天因为急着接孩子，我就突发奇想，把那张已经曝
: 光了的片子放在blot上，但是避开黑色的部分。把新的片子压在旧片子的上面，曝光十
: 秒，出来条带非常清晰。
: 反正那张废了的片子不用白不用，正好可以屏蔽信号。而且这样做也省时间。不过如果
: 你用phospho-imager，就不知道这招能不能用了。
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s******y
发帖数: 28562 | 16
没有那个那么灵敏。
【在 s****a 的大作中提到】
: 比pierce supersignal west femto灵敏很多么？
: 我们这没暗室做film只有ccd camera
:
: plus.
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o**d
发帖数: 3080 | 17 一抗应该多稀释个10－100倍。
【在 s******s 的大作中提到】
: 不在暗室都能看到。我以前有个超强antiserum，
: 膜上都是黄色的条带，连暗室都不用
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v***a
发帖数: 1242 | 18 哈哈
我也碰到过
做co-ip的IgG
好黄好黄
刚倒上ecl-plus就有了
【在 s******s 的大作中提到】
: 不在暗室都能看到。我以前有个超强antiserum，
: 膜上都是黄色的条带，连暗室都不用
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m*********7
发帖数: 5207 | 19 How did it go?
will be appreciated.
【在 c**k 的大作中提到】
: happen to have high noise Ab, tomorrow will have a try.
: -by the way, recently i am looking for reviews. any help regarding this will be appreciated.
:
: plus.
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m*********7
发帖数: 5207 | |
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g*******f
发帖数: 427 | 21
请问您这个是怎么做的，我一直在想能够买到这样一个装置就好了，手工将胶片放上的
话如果信号很强确实很难得到非常漂亮的带
【在 s******s 的大作中提到】
: 不在暗室都能看到。我以前有个超强antiserum，
: 膜上都是黄色的条带，连暗室都不用
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M****m
发帖数: 2142 | 22 你这个方法可以剔除背景只剩下需要的条带么？那这样很好，不过是啥原理呢？@@
【在 m*********7 的大作中提到】
: 不行！试过了，虽然能看见条带，可是背景太高。
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n***g
发帖数: 5027 | 23 厉害，学习了
【在 s******s 的大作中提到】
: 不在暗室都能看到。我以前有个超强antiserum，
: 膜上都是黄色的条带，连暗室都不用
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m*********7
发帖数: 5207 | 24 不是的，背景和条带的ECL signal同样的被film削弱，这样可以在低背景下看到中等强
度的条带。否则的话，就是在很高背景下看到很强的条带。后者被scan出来的图就非常
难看了。
【在 M****m 的大作中提到】
: 你这个方法可以剔除背景只剩下需要的条带么？那这样很好，不过是啥原理呢？@@
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v***a
发帖数: 1242 | 25 我想ls的意思就是說手工一开一合，不需要特别的装置吧
【在 g*******f 的大作中提到】
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: 请问您这个是怎么做的，我一直在想能够买到这样一个装置就好了，手工将胶片放上的
: 话如果信号很强确实很难得到非常漂亮的带
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A*********0
发帖数: 16 | |
m******5
发帖数: 1383 | 27 借地方问个问题，大家用过那种二抗带荧光标记用leika的机器看胶的系统么？ 那个灵
敏度高还是HPR灵敏度高 |
g*********5
发帖数: 2533 | 28 licor. say goodbye to film. |
G********e
发帖数: 528 | 29 赞
【在 s******s 的大作中提到】
: 不在暗室都能看到。我以前有个超强antiserum，
: 膜上都是黄色的条带，连暗室都不用
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