m**********d
发帖数: 137 | 1 用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系，稳定表达某doxycycline-inducible shRNA。
在in vitro测试phenotype很稳定
现在要把细胞在tet-off的状态打到裸鼠体内，等tumor长起来，再开始给doxycycline
以及相应的treatment。现在的问题是，doxy该怎么给，文献上很多都用doxycycline
drinking water，可我听说doxycycline可能会precipitate，很难控制老鼠喝进去的量
；还有人用doxycycline的食物，但似乎也不大好控制doxy的量。
不知是否有人用过oral gavage，似乎这样可以准确地定量doxy，隔天通过gavage给
doxy不知是否可行？
请问版哪位曾在in vivo试过pTRIPZ这个系统，它的doxy-inducible knockdown
efficiency和leakiness不知道还不好
谢谢 |
i*******n
发帖数: 48 | 2 我以前用dox-containing water,浓度没那么高，不会沉淀。（水里加点糖，老鼠可能
不喜欢喝dox水）
现在我们把dox做到food里面。
灌胃对小鼠伤害太大。
doxycycline
【在 m**********d 的大作中提到】
: 用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系，稳定表达某doxycycline-inducible shRNA。
: 在in vitro测试phenotype很稳定
: 现在要把细胞在tet-off的状态打到裸鼠体内，等tumor长起来，再开始给doxycycline
: 以及相应的treatment。现在的问题是，doxy该怎么给，文献上很多都用doxycycline
: drinking water，可我听说doxycycline可能会precipitate，很难控制老鼠喝进去的量
: ；还有人用doxycycline的食物，但似乎也不大好控制doxy的量。
: 不知是否有人用过oral gavage，似乎这样可以准确地定量doxy，隔天通过gavage给
: doxy不知是否可行？
: 请问版哪位曾在in vivo试过pTRIPZ这个系统，它的doxy-inducible knockdown
: efficiency和leakiness不知道还不好
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z*******t
发帖数: 21 | 3 我也用的是pTRIPZ，In-vivo用的是水加Dox。配方如下：
0.5gDox溶于23mL 50% 蔗糖溶液中，注入230mL（8OZ)袋装水中。终浓度：Dox，2mg/mL
，蔗糖，5%。水上盖锡箔纸避光，一周一换。
用qPCR可以检测到RFP表达，说明此浓度可用。
试过注射和灌胃。灌胃伤害太大，腹腔注射好像导致了腹水，原因不明。也试过食物（
找别人借的），老鼠不太爱吃，不过效果不错，也可以诱导RFP表达，只是太贵，好像
一买就是一个大包装，我用不了那么多，后来就一直用水了。 |
b**********8
发帖数: 349 | 4 楼主，请问你用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系是怎么操作的？
细胞染毒后稀释传代加药挑单克隆？还是只是加药筛选后pool所有的存活细胞？ |
m**********d
发帖数: 137 | 5 多谢楼上几位的热心回复！
我所用的细胞已经带有一个puromycin resistant的luciferase construct了，因此在
病毒infection之后没有办法再用puromycin筛选，幸好pTRIPZ vector有RFP，我用FASC
sorting拿到的细胞pool
【在 b**********8 的大作中提到】
: 楼主，请问你用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系是怎么操作的？
: 细胞染毒后稀释传代加药挑单克隆？还是只是加药筛选后pool所有的存活细胞？
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