m********o
发帖数: 13 | 1 想在Hela转一个GFP tag的蛋白，试过lipofectamine和xtremegene效果都不好，基本上
看不到荧光。同样的条件在293细胞里转得还不错。求助哪位有经验的有没有别的
transfection reagent推荐，或者有没有什么tips？谢谢~ |
s******y
发帖数: 28562 | 2 这个听起来太奇怪了。Hela 是最容易转的细胞之一。
你确实自己亲手用同一批做出来的同一个plamid 和同样的试剂来转染过293cell 么？
【在 m********o 的大作中提到】
: 想在Hela转一个GFP tag的蛋白，试过lipofectamine和xtremegene效果都不好，基本上
: 看不到荧光。同样的条件在293细胞里转得还不错。求助哪位有经验的有没有别的
: transfection reagent推荐，或者有没有什么tips？谢谢~
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g*********5
发帖数: 2533 | |
c*******0
发帖数: 190 | 4 Lipotransfectamine LTX&PLUS.
It is very good for Hela. |
a*****n
发帖数: 2835 | 5 毒性大不大？
我用2000毒性有点大啊
【在 c*******0 的大作中提到】
: Lipotransfectamine LTX&PLUS.
: It is very good for Hela.
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j******i
发帖数: 939 | 6 你记错了吧 HeLa是有名的hard to transfect的细胞 大概只有10-20%能transfect到
【在 s******y 的大作中提到】
: 这个听起来太奇怪了。Hela 是最容易转的细胞之一。
: 你确实自己亲手用同一批做出来的同一个plamid 和同样的试剂来转染过293cell 么？
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c*******0
发帖数: 190 | 7 Just lower down the Plus reagent dosage by half from the protocol they
provided. The cytotoxicity is not a problem.
【在 a*****n 的大作中提到】
: 毒性大不大？
: 我用2000毒性有点大啊
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s******y
发帖数: 28562 | 8 啊？为什么我用的HeLa都能轻松的达到80%呢？
而且我用的还是最普通的Lipofectamine。
刚才我上Lipofectamine2000的网站查了一下，上面说的效率是：
293F: 99%
HeLa: 94%
MDCK: 43%
这个和我印象中的一样。
http://tools.lifetechnologies.com/Content/SFS/ProductNotes/F_Li
【在 j******i 的大作中提到】
: 你记错了吧 HeLa是有名的hard to transfect的细胞 大概只有10-20%能transfect到
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X******n
发帖数: 914 | 9 多浪费，快去sigma买一瓶Pei,配上1升够你实验室用几十年了。效率不比lipo2000差。
【在 s******y 的大作中提到】
: 啊？为什么我用的HeLa都能轻松的达到80%呢？
: 而且我用的还是最普通的Lipofectamine。
: 刚才我上Lipofectamine2000的网站查了一下，上面说的效率是：
: 293F: 99%
: HeLa: 94%
: MDCK: 43%
: 这个和我印象中的一样。
: http://tools.lifetechnologies.com/Content/SFS/ProductNotes/F_Li
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s******y
发帖数: 28562 | 10 我惭愧的问一下，这个Pei 对于其他细胞，比方说MEF好用么？我们其实主要是转MEF更
多一些，用来做细胞生物。但是做生化的时候也用HeLa, 293.
【在 X******n 的大作中提到】
: 多浪费，快去sigma买一瓶Pei,配上1升够你实验室用几十年了。效率不比lipo2000差。
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X******n
发帖数: 914 | 11 MEF我很少瞬转，不过很多难转的肿瘤细胞都可以用PEI转的。 而且你可以它做病毒。 |
b***2
发帖数: 348 | 12 HeLa很好转的。会不会是质粒的问题。我用2000转PCDNA一点问题都没有。
【在 m********o 的大作中提到】
: 想在Hela转一个GFP tag的蛋白，试过lipofectamine和xtremegene效果都不好，基本上
: 看不到荧光。同样的条件在293细胞里转得还不错。求助哪位有经验的有没有别的
: transfection reagent推荐，或者有没有什么tips？谢谢~
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m********o
发帖数: 13 | 13 嗯，是同一支tube里的plasmid。要转的是一个细菌蛋白，如果有毒的话会影响转染效
率吗？但是细胞形态看起来都不错，也没什么漂浮的细胞。准备拿GFP vector再试一次
。不知道是不是因为HELA传代太多的原因？还有如果普通显微镜看不到荧光的话，
western有没有可能看到表达？问题太多了，谢谢大牛先~
【在 s******y 的大作中提到】
: 这个听起来太奇怪了。Hela 是最容易转的细胞之一。
: 你确实自己亲手用同一批做出来的同一个plamid 和同样的试剂来转染过293cell 么？
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m********o
发帖数: 13 | 14 谢谢~
【在 g*********5 的大作中提到】
: transit-lt1
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m********o
发帖数: 13 | 15 嗯 谢谢 正在试这个
【在 c*******0 的大作中提到】
: Lipotransfectamine LTX&PLUS.
: It is very good for Hela.
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m********o
发帖数: 13 | 16 同样质粒转293还好 你用western测还是用荧光？
【在 b***2 的大作中提到】
: HeLa很好转的。会不会是质粒的问题。我用2000转PCDNA一点问题都没有。
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s******y
发帖数: 28562 | 17 如果你确定你们的显微镜没有问题的话（比方说，你会不会放错了荧光filter啊？）
如果看都看不到的话，用WB是很渺茫的，因为其实眼睛能看到的敏感度比WB高。不过你
们都这样了，那就死马当活马医用WB试试看吧。
如果蛋白对细胞有毒的话，凡是转成功的都死掉了，当然会影响效率，但是没有道理一
个细菌蛋白对293 一点毒性都没有但是对HeLa有那么高的选择毒性。
我赞同你用GFP vector试一试，看看到底是细胞的问题还是plasmid的问题。
【在 m********o 的大作中提到】
: 嗯，是同一支tube里的plasmid。要转的是一个细菌蛋白，如果有毒的话会影响转染效
: 率吗？但是细胞形态看起来都不错，也没什么漂浮的细胞。准备拿GFP vector再试一次
: 。不知道是不是因为HELA传代太多的原因？还有如果普通显微镜看不到荧光的话，
: western有没有可能看到表达？问题太多了，谢谢大牛先~
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m********o
发帖数: 13 | |
t********n
发帖数: 64 | 19 估计细胞代数太多状态太差了，Hela的转染效率随便就到80%的，我个人感觉比293还好
转 |
f*********9
发帖数: 258 | |
